PCRと遺伝子組換え 想定問題 1

PCR法の3つの段階が，それぞれ何をしているかを問う問題です。

温度・結合の種類・酵素の性質を確かめます。

①：熱変性で切れるのは塩基どうしの水素結合。共有結合ではないので誤り

②：アニーリングの温度が低すぎると，少し合わない場所にもプライマーがくっつき，目的外の DNA が増えることがある。正しい

③：長い領域ほどコピーに時間がかかるので，伸長時間は長くする。誤り

④：毎回95℃近くまで加熱するので，好熱菌由来の耐熱性ポリメラーゼが適する。誤り

⑤：新しい鎖はプライマーから伸びるので，プライマーは増えた DNA の端になる。誤り。答えは ②

①（共有結合）：熱変性で切れるのは水素結合です。ホスホジエステル結合は切れません。

④（大腸菌由来）：高温をくり返すので，熱に弱い酵素は使えません。

• 熱変性（約95℃）：2本鎖の間の水素結合を切って，1本ずつにほどく（テキスト・覚えること）
• アニーリング（約55〜65℃）：増やしたい部分の両端に合う短い DNA（プライマー）をくっつける（テキスト・覚えること）
• 毎回高温になるので，耐熱性の高い DNA ポリメラーゼ（好熱菌の Taq ポリメラーゼなど）を使う（テキスト・覚えること）
• アニーリングの温度を下げすぎると，目的外の場所にもくっつく（非特異的）（テキスト・ひっかけ）